Culture in vitro

Comme vous m' avez demandé des informations sur l' in vitro je vais mettre mon devoir que j' ai fait il y a 2 semaines sur la culture de méristèmes.

LA CULTURE IN-VITRO

CULTURE DE MERISTEMES IN-VITRO

1°) Définition :

Les méristèmes sont des zones de cellules à divisions intenses, situés au cœur des bourgeons et des extrémités de racines et à l'origine des tiges feuillées ou du système racinaire.
En 1950, les travaux de Limasset et Cornuet ont montré que les méristèmes étaient indemnes de virus.

2°) Technique :

La culture de méristème est une culture aseptique sur milieu artificiel du dôme apical sans ébauche foliaire. Il mesure 0,2 à 0,3 mm de côté et la dissection se fait sous loupe binoculaire. La technique peut être associée à de la thermothérapie: culture à température élevée, pour favoriser l'élimination des virus. C'est la seule façon d'obtenir des plantes saines indemnes de virus. Son champ d’application s’est un peu étendu puisqu’elle sert également dans certains cas de point de départ pour une micropropagation.

3°) Protocole :

Choisir une plantes puis choisir dessus un rameau. Après désinfection ou non (suivant les espèces) du rameau de départ, le prélèvement se fait sous une loupe binoculaire, sous hotte stérile ou paillasse désinfectée.
Le fragment de rameau est débarrassé de ses feuilles, puis les ébauches foliaires sont éliminées.
Quand le méristème apparaît, on ôte délicatement les dernières ébauches foliaires, puis l’ on découpe un minuscule cube dont les faces sont tangentes au méristème ; une dernière section transversale permet de le détacher. Il est aussitôt placé dans un tube à hémolyse, sur milieu gélosé. Toutes ces opérations doivent être conduites rapidement afin d’ éviter le dessèchement du méristème et limiter les risques de contamination.

-La croissance, les méristèmes, minuscule partie de la plante, ont les mêmes besoin nutritifs que la plante entière. Toutefois, ne recevant plus certaines substances fournies par d’ autres parties du végétal, ils ont des exigences particulières. Ces besoins seront satisfaits par le milieu des cultures. On utilise soit des milieux spécifiques « maison » ou d’ une manière générale, des milieux déjà proposés par des chercheurs. Les plus courants étant ceux de Murashige et Skoog, Knop, Heller.

-La lumière n’ est pas strictement indispensable pour une bonne croissance des méristèmes mais sa présence donne de meilleurs résultats. Les intensités apportées sont comprises entre
1 000 et 3 000 lux. Un régime de 16heures de jour, pour 8 heures de nuit, est souvent adopté bien qu’ un éclairage en continu soit possible.

-L’ humidité relative doit être proche de la saturation. Les tubes étant en général fermés pour des raisons sanitaires. On arrive très facilement à ce résultat sans problème.

-La température doit être impérativement contrôlée, d’ où l’ utilisation d’ une chambre de culture en moyenne entre 22 et 25°C.

-L’ asepsie conditionne la réussite. Il faut donc :
-stériliser le milieu,
-désinfecter très fréquemment le matériel de prélèvement,
-éviter au minimum les risques de contamination, en travaillant rapidement sur une paillasse désinfectée ou en milieu stérile (hotte à flux laminaire).

-Taux de réussite :

Il est très variable et le taux de régénération varie de 0 à 80%, les causes de cette variation sont très diverses.

-Facteurs techniques :

Les méristèmes étant de très petite taille (de l’ ordre de 1/10 de mm), il arrive très souvent que des tissus voisins soient prélevés en même temps.

-Facteurs physiologiques :

Le stade d’ évolution de la plantes a une grande importance. En général, le taux de réussite est supérieurs pour les espèces herbacées. Les chances de régénération sont également plus importantes quand le prélèvement se fait sur une plante en pleine croissance. Les ligneux posent un problème plus délicat. Le méristème prélevé sur une plante en croissance a parfois tendance à brunir et à se nécroser sur le milieu de culture. En revanche, les prélèvements de méristèmes sur des bourgeon au repos, mais dormance levée, donnent de meilleurs résultats en culture mais le taux de régénération est plus faible.

-Facteurs pathologiques :

Le taux de régénération est en relation directe avec le statut viral. Certains virus s’ éliminent facilement, d’ autres plus difficilement. Dans le cas de réussite nulle, on peut associer la thermothérapie et la culture de méristème. On place la plante à régénérer à la température d’ élimination du virus pendant le temps voulu, puis on pratique un prélèvement de méristème sur cette plante.

-Contrôles :

Comme le taux de régénération n’ est pas garanti, il est impératif de vérifier l’ état sanitaire de la plante obtenue. Ces contrôles sont faits avec des techniques d’ indexage. Il faut pratiquer trois indexages pour avoir l’ assurance d’ une régénération totale. Il est également important de vérifier la conformité génétique de la plante obtenue. Ce contrôle visuel doit établir qu’ aucune mutation n’ a eu lieu.
Il est à remarquer que les premiers stades de croissance d’ un méristème sont semblables à ceux d’ une plantule issue de semis, ce qui semble mettre en évidence le phénomène de rajeunissement.

4°) Applications :

De nombreuses variétés de diverses espèces ont été sauvegardées grâce à cette technique: pomme de terre (Belle de Fontenay en 1954), dahlias, fraisiers, vigne, iris, framboisiers etc. La Violette de Toulouse a été sauvée du déclin grâce à la culture de méristèmes qui a permis de régénérer des plantes sans virus.
Beaucoup de plantes horticoles de grande diffusion tels le Pélargonium, le chrysanthème etc. sont produites à partir de pieds mères qui ont été assainis par culture de méristèmes. Il en est de même pour des espèces maraîchères tel l'artichaut ou encore le fraisier.

5°) Avantages de la culture :

-La culture de méristèmes permet le sauvetage des variétés menacées de disparition car très virosées.

-Elle concerne essentiellement les plantes à reproduction par voie végétative: bouturage, marcottage, etc. tels le Pélargonium, le dahlia, le chrysanthème, la pomme de terre, l'artichaut, le fraisier, framboisier, etc. Car cette voie favorise la transmission des virus à la descendance.

-Les plantes produites sont saines: sans virus, champignons et bactéries et répondent aux normes phytosanitaires d'échanges internationaux de plus en plus draconiennes.

-Les plantes assainies ont une vigueur accrue, et des qualités de floraison et de fructification restaurées.

-On obtient des variétés conformes à la variété d'origine et que l'on peut multiplier en grande quantité, la production est homogène.

6°) Limites de la culture :

-Les plantes obtenues sont indemnes de virus mais ne sont pas devenues résistantes aux virus.

-Elles peuvent être recontaminées via des insectes si des mesures de prophylaxie ne sont pas prises.

-Pour certaines variétés qui présentent des chimères:plantes panachées de Pétunia ou de Pélargonium par exemple, par culture de méristèmes il est possible de ne pas retrouver à la régénération ce caractère horticole.

7°) Petite conclusion :

La culture de méristèmes tient une place importante dans le milieu horticole car elle permet de sauvegarder des plantes de l’ extinction et de renouveler des pieds mères sans virus pour les horticulteurs, qui par la suite feront des boutures avec ses mêmes pieds régénérés. Ils doivent cependant acheter des nouveaux pieds mères tous les 6 mois en moyenne pour avoir toujours des pieds mères indemnes de virus.

Voila mon dossier, il y avait des photos mais il faut les héberger et pour le moment j' ai pas trop le temps.

Si vous avez des questions dite le moi.

Ca m' a beaucoup interessé, merci d' avoir pris le temps de mettre ce texte sur le forum.
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Je recherche toutes formes d' ampullarias à acheter sauf ampullarias speckled, red et forme verte.
Merci.

Très interessant merci Wink

Un très bon sujet.
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http://seenas.miniville.fr/ind
http://seenas.miniville.fr/

Merci, je suis pas le premier de la classe en in vitro pour rien.

Super, merci beaucoup Carni63, ça va bien m'éclairer !
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http://mimosa.blogjardin.com/

Quand j' aurai du temps je posterai une photo pour les méristèmes. La prochaine fiche je pourrai faire la micropropagation, la plus utilisée et celle qui peut être faite directement aprés une fois la plante sans virus. Elle sert pour la multiplication du saint paulia et kalanchoë surtout.

Voila bonne fin de soirée à tous.

J'ai pas encore lu mais ca m'a l'air tres interessant

Merci carni Wink

Voilà j'ai lu

C'est bref, c'est complet, c'est simple

En gros c'est niquel

Etant en premiere et ayant etudier la mitose et egalement un td relatant de la culture in vitro c'est cool

un grand merci carni !!! Trés sympas de ta part d'avoir fais cette fiche sur la culture in-vitro Very Happy

Bon voilà la prof a corrigée le devoir et j' ai eu 19 sur 20 meilleure note de la classe. Sa va tranquille l' in-vitro pour moi.

J' ai rarement eu des 19/20. Laughing

Bravo à toi pour cette excellente note. cheers

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Merci.

Félicitation ! cheers

Le prof n'a pas osé te mettre 20/20 Wink

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Non c' est juste pour faire voir que c' est lui le prof et pas moi.
J' ai un pote qui avait le même sujet mais lui est en pépinière la prof lui avait mis 16, elle a relu ma copie et elle lui a changer la note pour lui mettre 15. Faut dire que je lui est donné des trucs aussi, il y avait des trucs similaires donc elle lui a baissé sa note.

Merci pour cette fiche Carni elle est très intéressante